HPLC柱前衍生和柱后衍生的相關問題

    柱前衍生被測組分通過衍生化反應，轉化為衍生化產物，然后再經過色譜柱進行分離。液相色譜法中柱前衍生的目的是:通過衍生化反應，使原來不能直接被檢測的組分轉化為能被所用檢測器檢測的物質;使被測組分與衍生化試劑有選擇地參加反應，而與樣品中的其他組分分離;改變被測組分在色譜柱的出峰次序，使之更有利于分離。柱前衍生的點是可以不必嚴格限制衍生化反應條件，可以允許較長的反應時間及使用各種形式的反應器。其缺點是當一個復雜組分樣品經過衍生化反應后，有可能產生多種衍生化產物，給色譜分離帶來困難。

    柱后衍生利用衍生反應使被測物與相應的試劑反應，以改變其物理或化學性質，使其被檢測到。例如將發色基團或熒光基團鍵合到樣品中去，多放大檢測靈敏度，柱后衍生系統開創了柱后衍生系統性能、價格及外形的標準。

    HPLC柱前衍生和柱后衍生的相關問題？1）為什么要衍生？2）衍生化的分類？3）進行衍生，適用的化合物有哪些？4）進行衍生化的要求有哪些？5）柱前衍生和柱后衍生的缺點？

    答：色譜技術中的化學衍生法系指在色譜過程中用的化學試劑（一般稱為衍生化試劑或標記試劑）使樣品成分轉變相應的衍生物之后進行分離檢測或進行檢測的方法。目的為：

    1．將紫外—可見吸收功能基團引入被檢測對象或將其轉變為熒光衍生物，以提檢測靈敏度；

    2．提對分析樣品的分離和選擇性。

    從是否與HPLC系統聯機的角度，化學衍生法分為在線（on line）與離線（Off line）兩種。從發生衍生化的場合，分為柱前衍生法（pre-columnderivatization）與柱后衍生法（post-columnderivatization）兩種。

    目前，在HPLC中，以離線的柱前衍生法（簡稱柱前衍生法）與在線的柱后衍生法（簡稱柱后衍生法）使用居多。